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产品名称 | 规格 | 货号 |
UMNSAH/DF-1 (鸡胚成纤维细胞) | 1×10⁶/T25培养瓶 | GOY-01X0277 |
商品详情：
名称；UMNSAH/DF-1 (鸡胚成纤维细胞)
别称 UMNSAH-DF-1; UMNSAH-DF 1;
UMNSAH-DF1; UMNSAH/DF#1; DF-1; DF1; Douglas Foster-1
种属 鸡
生长特性 贴壁细胞
细胞形态 成纤维细胞样
生长培养基 DMEM＋10%
FBS＋1% P/S
冻存条件
冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO
温度：液氮
培养条件
气相：空气，95%；CO2，5%
温度：39℃（Max.40℃，Min.38℃）
推荐传代比例 1:3-1:4
推荐换液频率 2~3次/周
注意事项 1、该细胞培养难度较高，温度波动会导致细胞空泡增多； 2、该细胞为38℃~40℃培养，最佳培养温度为39℃，37℃培养会影响细胞状态，建议提前准备专用培养箱； 3、受温度波动影响，收货常见细胞空泡较多，稳定培养后可恢复。
背景描述 UMNSAH/DF-1细胞是起源于10日龄的ELL-0鸡蛋的鸡细胞株，自发永生化。分离原代鸡胚成纤维细胞并在培养液中培养，传代直到衰老；在衰老过程中离心以保持细胞培养在30%到60%满；不衰老的克隆进行鉴定并传代不少于30次。在软琼脂上没有观察到克隆增殖，说明UMNSAH/DF-1细胞是永生化而没有转化。UMNSAH/DF-1细胞可作为病毒增殖、重组蛋白表达和重组病毒生产的基质。
年龄（性别） 10日龄
组织来源 胚胎，自发永生化
细胞类型 自发永生化细胞
生物安全等级 1
倍增时间 ~22-36 hours
致瘤性 No, in immunosuppressed mice.No, in semisolid medium.
细胞培养步骤：
一、UMNSAH/DF-1 (鸡胚成纤维细胞)复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
二、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a）、 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞，脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
b）、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。
PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。
三、细胞冻存：
1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2、添加0.25%消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3、用适量的冻存液重悬细胞，并放置于冻存管中；
4、先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃
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