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ELISA试剂盒用纯化的猪（Cortisol）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入猪（Cortisol），再与HRP标记的猪（Cortisol）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的猪（Cortisol）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中（Cortisol）浓度。