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小鼠胚胎干细胞

简要描述:产品可保小鼠胚胎干细胞的生长状态。本产品中已包含小鼠胚胎干细胞生长所需的各种成分,无需添加任何成分,可直接用于小鼠胚胎干细胞的体外培养。本产品仅供进一步科研使用,不得用于诊断、治疗、临床、家庭及其它用途。

  • 产品型号:GOY-01X1408
  • 厂商性质:科研
  • 更新时间:2023-10-24 00:00:00
  • 访  问  量:186

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小鼠胚胎干细胞

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产品名称:小鼠胚胎干细胞

货号:GOY-01X1408

分类:原代细胞

2.组织来源:囊胚

3.产品规格:5×105cells/T25细胞培养瓶

4.细胞简介:小鼠胚胎干细胞分离自囊胚胚胎组织;胚胎干细胞(Embryonic stem cellESCs,简称ESEKESC细胞)是早期胚胎(原肠胚期之前)或原始性腺中分离出来的一类细胞,它具有体外培养无限增殖、自我更新和多向分化的特性。无论在体外还是体内环境,ES细胞都能被诱导分化为机体几乎所有的细胞类型。进一步说,胚胎干细胞(ES细胞)是一种高度未分化细胞。它具有发育的全能性,能分化出成体动物的所有组织和器官,包括生殖细胞。ES细胞具有与早期胚胎细胞相似的形态结构,细胞核大,有一个或几个核仁,胞核中多为常染色质,胞质胞浆少,结构简单。体外培养时,细胞排列紧密,呈集落状生长。用碱性磷酸酶染色,ES细胞呈棕红色,而周围的成纤维细胞呈淡黄色。细胞克隆和周围存在明显界限,形成的克隆细胞彼此界限不清,细胞表面有折光较强的脂状小滴。细胞克隆形态多样,多数呈岛状或巢状。小鼠ES细胞的直径7 微米~18 微米,猪、牛、羊ES细胞的颜色较深,直径12 微米~18微米。胚胎干细胞与普通细胞有显著差别,有其特定的生长特性和特定的标志,例如碱性磷酸酶活性非常高,带有胚胎阶段特异性表面抗原( Stage- specific embryonic antigens,SSEA),人类胚胎干细胞还带有高分子量的糖蛋白TRA1-60TRA-1-81等标志,这些特性和标志均可以用于对胚胎干细胞进行鉴定,除此之外,胚胎干细胞还可以在体外永久传代,并保持正常核型。在体外培养体系中加入分化抑制剂如白血病抑制因子( Leukaemia inhibitory factor,LF)或者在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层(MEF)上培养时,胚胎干细胞都能呈克隆性增殖,长期保持核型正常和稳定,冻存解冻也不影响不分化的特性。另外,胚胎干细胞还表现岀高水平端粒酶活性,目前证明端粒酶与细胞衰老密切相关,多数成熟细胞的端粒酶活性都很低。这些都是胚胎干细胞与成熟细胞不同的重要特点,也可能是其复制生命期限远比体细胞长的原因。

5.方法简介:公司实验室分离的小鼠胚胎干细胞采用分离囊胚组织,去除胚胎透明带、使用特制专用培养基筛选培养,消化传代纯化制备而来,细胞总量约为5×105cells/瓶。

6.质量检测:公司实验室分离的小鼠胚胎干细胞经Oct-4免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1HBVHCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

7.培养信息:包被条件 明胶(0.1%) 培养基 含LIFBMPPenicillinStreptomycin等 换液频率 每2-3天换液一次; 生长特性 贴壁 细胞形态 短梭形、多角形 传代特性 可传5-8代左右 消化液 0.025% 培养条件 气相:空气,95%CO25%



培养操作

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小鼠胚胎干细胞1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。      
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

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