猪骨髓间充质干细胞（BMSC）分离自骨髓；骨髓是机体的造血组织，位于身体的许多骨骼内。成年动物的骨髓分两种：红骨髓和黄骨髓。红骨髓能制造红细胞、血小板和各种白细胞。血小板有止血作用，白细胞能杀灭与抑制各种病原体，包括细菌、病毒等；某些淋巴细胞能制造抗体。因此，骨髓不但是造血器官，它还是重要的免疫器官。骨髓是存在于长骨（如肱骨、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如髂骨）的稀松骨质间的网眼中，是一种海绵状的组织，能产生血细胞的骨髓略呈红色，称为红骨髓。出生时，红骨髓充满全身骨髓腔，随着年龄增大，脂肪细胞增多，相当部分红骨髓被黄骨髓取代，最后几乎只有扁平骨骨髓腔中有红骨髓。骨髓基质系统内存在的骨髓间充质干细胞是一种除造血干细胞以外的、具有高度自我更新能力和多向分化潜能的干细胞，可以向骨、软骨、肌组织、皮肤、脂肪、神经等多种组织分化，因此可以作为组织工程中的种子细胞。在骨髓中，BMSC占骨髓有核细胞总数的0.001%-0.1%，含量极低。骨髓间充质干细胞的体外培养条件要求较高，在培养过程中，受贴壁时间、种植密度、血清含量、培养温度和培养基pH值等条件的影响。
产品属性 product attributes
产品名称 猪骨髓间充质干细胞
简称 BMSCs;MSCs
组织来源 骨髓
默认种属 小香猪，其他咨询
培养基： 猪骨髓间充质干细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
猪骨髓间充质干细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测 quality test
实验室分离的猪骨髓间充质干细胞经CD90免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介 method
实验室分离的猪骨髓间充质干细胞采用冲洗骨髓、密度梯度离心、差速贴壁法结合培养基筛选制备而来。
操作步骤 operation steps
复苏前全套准备工作：37℃水浴预热猪骨髓间充质干细胞完全培养基，准备无菌离心管、培养瓶、PBS 缓冲液、胰酶消化液，超净台紫外消毒半小时，核对冻存干细胞标签；原代干细胞易分化，确认培养基组分完好无变质，细胞培养箱运行稳定。
冻存干细胞水浴解冻：取出液氮冻存管，快速投入 37℃水浴，轻柔晃动冻存管，1‑2min 融化冻存液，留存少量冰晶，75% 酒精擦拭冻存管外壁，带入超净台，尽量缩短室温暴露时长，降低干细胞凋亡、异常分化。
稀释离心去除冻存保护剂：将细胞悬液缓慢滴加到含有预温完全培养基的 15mL 离心管，轻柔吹打混匀，850r/min 离心 6min，离心完毕，小心弃除上清液，彻底去除 DMSO 冻存保护剂，不要扰动底部细胞沉淀。
重悬制备单细胞悬液接种：加入猪骨髓间充质干细胞完全培养基，轻柔吹打管底细胞沉淀，制备均匀单细胞悬液，计数后按照推荐密度接种 T25 培养瓶，十字摇匀，细胞均匀铺于瓶底。
培养箱恒温静置孵育：放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱孵育，48h 内不移动培养瓶，给骨髓间充质干细胞充足贴壁时间，维持细胞干性。
换液和干细胞状态监测：复苏 24‑48h 后更换预热新鲜培养基，去除悬浮死亡细胞；每 2‑3 天换液，显微镜观察长梭形干细胞形态，留意细胞是否出现形态异常分化，排查细菌真菌污染。
传代消化收获细胞：细胞汇合 75‑85% 开展传代，弃培养基，PBS 清洗瓶壁，胰酶消化，镜下细胞收缩离散变圆，完全培养基终止消化，收集细胞离心重悬分瓶扩增；严格控制传代次数，高代干细胞增殖、分化能力下降，优先选用低代细胞开展诱导实验。
