猪心脏瓣膜内皮细胞分离自心脏瓣膜组织；心脏是脊椎动物身体中最重要的一个器官，主要功能是为血液流动提供压力，把血液运行至身体各个部分。心脏由心肌构成，左心房、左心室、右心房、右心室四个腔组成。左右心房之间和左右心室之间均由间隔隔开，故互不相通，心房与心室之间有瓣膜（房室瓣），这些瓣膜使血液只能由心房流入心室，而不能倒流。心脏的作用是推动血液流动，向器官、组织提供充足的血流量，以供应氧和各种营养物质，并带走代谢的终产物（如二氧化碳、无机盐、尿素和尿酸等），使细胞维持正常的代谢和功能。心脏瓣膜在心脏永不停止的血液循环活动中扮演的角色即普通又关键：瓣膜相当于门卫，阻止血液回流于刚刚离开的心室。在心房与心室之间，在心室与离开心室的血管之间，都有瓣膜。血液流过后，瓣膜就会合上最常见的瓣膜问题是二尖瓣脱垂，“二尖瓣”这个词源自“主教冠”，它是主教戴的帽子，有两个尖。位于左心房和左心室之间的瓣膜不能正常闭合。
产品属性 product attributes
产品名称 猪心脏瓣膜内皮细胞
组织来源 心脏组织
默认种属 小香猪，其他咨询
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）
培养基： 猪心脏瓣膜内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 内皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传2-3代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
猪心脏瓣膜内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测 quality test
实验室分离的猪心脏瓣膜内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介 method
实验室分离的猪心脏瓣膜内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
操作步骤 operation steps
复苏实验前期准备：37℃水浴预热猪心脏瓣膜内皮细胞专用完全培养基，准备无菌离心管、培养瓶、PBS 缓冲液、低浓度胰酶消化液，超净台紫外灭菌 30min，核对冻存管标签；瓣膜内皮细胞属于原代细胞，细胞脆弱，仔细检查试剂无浑浊微生物污染，确认培养箱参数稳定。
冻存细胞水浴快速融化：取出液氮冻存管，快速置于 37℃水浴，轻晃冻存管加速融化，1‑1.5min 完成解冻，仅残留微小冰晶，取出冻存管，75% 酒精擦拭外壁，移入超净工作台，减少细胞室温暴露造成的损伤。
稀释离心去除 DMSO 保护剂：将细胞悬液缓慢滴入装有预温完全培养基的 15mL 离心管，轻柔吹打混匀，800r/min 离心 6min，离心结束，小心弃去上层上清液，充分去除冻存保护剂，保护底部细胞沉淀。
温和重悬制备单细胞悬液接种：加入猪心脏瓣膜内皮细胞完全培养基，轻柔低速吹打细胞沉淀，禁止暴力吹打损伤细胞膜，制备单细胞悬液，计数后按标准密度接种 T25 培养瓶，缓慢十字摇晃培养瓶，细胞均匀铺在瓶底。
培养箱静置孵育贴壁：放置 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育，48h 内尽量不挪动培养瓶，心脏瓣膜内皮细胞贴壁速度较慢，需要稳定环境完成贴壁伸展。
换液操作和细胞形态观察：复苏 48h 后开展首次换液，缓慢吸除旧培养基，PBS 轻柔漂洗，加入预热新鲜培养基，去除悬浮死亡细胞；每 2‑3 天更换培养基，显微镜观察鹅卵石样内皮细胞形态，警惕杂细胞污染混杂。
传代消化收集细胞：细胞汇合 70‑75% 进行传代，弃旧培养基，PBS 洗涤瓶壁细胞，低浓度胰酶短时间温和消化，镜下细胞收缩变圆，加入完全培养基终止消化，收集细胞悬液离心，重悬分瓶扩增；原代瓣膜内皮细胞传代能力有限，尽量使用低代细胞用于后续实验。
