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人肺微血管内皮细胞

人肺微血管内皮细胞

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产品概述 product description

细胞简介 人肺微血管内皮细胞分离自肺组织;肺是机体的呼吸器官,位于胸腔,左右各一,覆盖于心之上。肺有分叶,左二右三,共五叶。肺经肺系(指气管、支气管等)与喉、鼻相连,故称喉为肺之门户,鼻为肺之外窍。微血管内皮细胞密切参与包括再生、发育、伤口愈合等一系列生理及炎症反应。细胞呈梭形或多角形,形成单层后呈鹅卵石样或铺路石样排列。肺微血管内皮细胞构成半选择性屏障,该屏障对于肺气体交换,调节液体和可溶物在血液与肺间质之间的流动具有重要意义。

产品属性
产品名称 人肺微血管内皮细胞
组织来源 肺组织
默认种属 人,其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
包被条件: PLL(0.1 mg/mL)或明胶(0.1%)
培养基: 人肺微血管内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率: 每2-3天换液一次
生长特性: 贴壁
细胞形态: 内皮细胞样
传代比例: 1:2
传代特性: 可传2-3代
消化液: 0.25%胰蛋白酶
人肺微血管内皮细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
质量检测 实验室分离的人肺微血管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
方法简介 实验室分离的人肺微血管内皮细胞采用组织贴块法并结合内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
一、实验前准备
1. 器械:无菌眼科剪、眼科镊、止血钳、培养皿、离心管、细胞筛(200 目、400 目)、移液管
2. 试剂:无菌 PBS 缓冲液、双抗(青霉素 + 链霉素)、Ⅰ 型胶原酶、内皮细胞专用完全培养基、75% 医用酒精
3. 耗材:T25 培养瓶、冻存管、移液枪枪头,提前紫外灭菌操作台 30min
二、取材与预处理
1. 取离体人肺外周肺组织(远离大血管),放入预冷含 1% 双抗的 PBS 中浸泡转运
2. 剔除肺组织表面胸膜、支气管、粗大动静脉,反复 PBS 漂洗 5 次去除淤血与杂质
3. 将组织剪切成 1mm³ 细小组织碎块
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块移入离心管,加入 0.1%Ⅰ 型胶原酶溶液,37℃水浴振荡消化 45min
2. 消化期间每 15min 轻柔吹打 1 次,终止消化时加入等量完全培养基中和酶活性
3. 混合液依次过 200 目、400 目细胞筛去除未消化组织团块,收集滤液
四、纯化与接种培养
1. 滤液 1200r/min 离心 8min,弃上清,PBS 重悬洗涤沉淀 2 次
2. 采用差速贴壁法纯化:悬液接种培养皿,37℃孵育 30min,吸出未贴壁细胞悬液(去除成纤维细胞)
3. 将纯化细胞接种于内皮专用完全培养基,37℃5% CO₂培养箱静置培养,次日换液