小鼠肺微血管内皮细胞

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产品概述 product description

细胞简介小鼠肺微血管内皮细胞分离自肺组织；肺是机体的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆盖于心之上。肺有分叶，左二右三，共五叶。肺经肺系（指气管、支气管等）与喉、鼻相连，故称喉为肺之门户，鼻为肺之外窍。微血管内皮细胞密切参与包括再生、发育、伤口愈合等一系列生理及炎症反应。细胞呈梭形或多角形，形成单层后呈鹅卵石样或铺路石样排列。肺微血管内皮细胞构成半选择性屏障，该屏障对于肺气体交换，调节液体和可溶物在血液与肺间质之间的流动具有重要意义。

产品属性

产品名称小鼠肺微血管内皮细胞
组织来源肺组织
默认种属昆明小鼠，其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25 / 5×10^5Cells/Vial
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）
培养基：小鼠肺微血管内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率：每2-3天换液一次
生长特性：贴壁
细胞形态：内皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性：可传1-2代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠肺微血管内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

质量检测

质量检测实验室分离的小鼠肺微血管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

方法简介

方法简介实验室分离的小鼠肺微血管内皮细胞采用组织贴块法并结合内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。

操作步骤

一、实验前准备
1. 试剂：DMEM 高糖完全培养基（10% 胎牛血清 + 1% 双抗 + 内皮细胞生长添加剂 ECGS）、PBS 缓冲液、0.25% 胰蛋白酶 - EDTA、Ⅱ 型胶原酶、肝素钠溶液、75% 医用酒精。
2. 器械与耗材：超净台、CO₂培养箱、解剖剪 / 镊子、无菌培养皿、15mL 离心管、细胞筛（200 目 + 400 目）、细胞培养瓶、移液枪。
3. 动物：6~8 周龄健康 SPF 级小鼠，雌雄不限；所有器械高温高压灭菌，台面紫外消毒 30min。
二、取材与预处理
1. 小鼠颈椎脱臼处死，75% 酒精浸泡全身 5min 消毒，固定于无菌解剖板，逐层剪开胸腔暴露完整肺组织。
2. 小心剥离肺门处气管与大血管，完整摘取双肺，预冷无菌 PBS 反复漂洗 3 次，去除肺表面血迹与杂质，剪去肺边缘坏死组织。
3. 将肺组织转移至无菌培养皿，剪碎至 1mm³ 左右组织碎块，加入预冷 PBS 吹打漂洗，静置弃上清，重复 3 次去除红细胞。
三、细胞分离与消化
1. 按组织体积 1:3 加入 0.1%Ⅱ 型胶原酶消化液，37℃水浴摇床低速振荡消化 30~40min，期间每 10min 轻柔吹打一次。
2. 消化完成后加入等体积完全培养基终止酶解，先后过 200 目、400 目无菌细胞筛，滤除未消化组织团块，收集滤液至离心管。
3. 1000r/min 离心 5min，弃上清，PBS 重悬沉淀再次离心洗涤 1 次，去除胶原酶残留。
四、纯化与接种培养
1. 沉淀用内皮完全培养基重悬，接种于培养瓶，置于 37℃、5% CO₂培养箱孵育 45min，利用差速贴壁去除成纤维细胞、平滑肌杂细胞。
2. 吸出上清细胞悬液转接新培养瓶，添加肝素钠抑制平滑肌细胞增殖，常规培养；24h 后首次换液，去除悬浮死细胞。
3. 细胞汇合度达 85%~90% 时，胰酶常规消化传代；采用 CD31 免疫荧光鉴定内皮纯度，P1~P3 代用于后续实验。

小鼠肺微血管内皮细胞

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