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小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞

小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞

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产品概述 product description

细胞简介 小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞分离自肺组织;肺泡由单层上皮细胞构成的半球状囊泡。肺中的支气管经多次反复分枝成无数细支气管,它们的末端膨大成囊,囊的四周有很多突出的小囊泡,即为肺泡。小肺泡细胞,又称I型肺泡细胞,厚约0.1微米,基底部是基底膜,无增殖能力。大肺泡细胞,又称Ⅱ型肺泡细胞,分泌表面活性物质(二棕榈酰卵磷脂),以降低肺泡表面张力。Ⅱ型肺泡细胞位于Ⅰ型肺泡细胞之间,数量较Ⅰ型肺泡细胞多,但覆盖面积比Ⅰ型肺泡细胞小。细胞立方形或圆形,顶端突入肺泡腔。细胞核圆形,胞质着色浅、呈泡沫状。电镜下,细胞游离而有少量微绒毛,胞质内富含线粒体和溶酶体,有较发达的粗面内质网和高尔基复合体。核上方有较多的分泌颗粒,电子密度高、大小不等,直径约0.1-1.0 μm颗粒内含有平行排列的板层状结构,称为嗜饿性板层小体。小体内的主要成分为磷脂,以二棕榈酰卵磷脂为主,此外还有糖胺多糖及蛋白质等。颗粒内物质释放出来后,在肺泡表面形成一层粘液层,称为表面活性物质(surfactant)。表面活性物质有降低肺泡表面张力、稳定肺泡大小的作用。呼气时肺泡缩小,表面活性物质密度增加,表面张力降低,防止肺泡过度塌陷;吸气时肺泡扩张,表面活性物质密度减小,肺泡回缩力加大,可防止肺泡过度膨胀。表面活性物质的缺乏或变性均可引起肺不张,过度通气可造成表面活性物质缺乏;吸入毒气可直接破坏表面活性物质。Ⅱ型肺泡细胞有分裂、增殖并分化为Ⅰ型肺泡细胞的潜能,故具有修复受损伤上皮的作用。

产品属性
产品名称 小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞
组织来源 肺组织
默认种属 昆明小鼠,其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
包被条件: 鼠尾胶原Ⅰ(2-5 μg/cm²)
培养基: 小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率: 每2-3天换液一次
生长特性: 贴壁
细胞形态: 上皮细胞样
传代比例: 1:2
传代特性: 可传1-2代
消化液: 0.25%胰蛋白酶
小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
质量检测 实验室分离的小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞经SP-C免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
方法简介 实验室分离的小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法,并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
一、实验前准备
1. 手术器械、培养器皿高压灭菌;超净台紫外消杀,小鼠麻醉器械提前消毒。
2. 配制试剂:无菌 D-Hanks 液(加双抗)、0.1%Ⅰ 型胶原酶消化液、DMEM/F12 完全培养基、红细胞裂解液。
3. 小鼠腹腔麻醉耗材、气管插管针头提前备好冰上预冷试剂。
二、取材与预处理
1. 颈椎脱臼处死小鼠,胸腹腔 75% 酒精消毒,暴露气管与双肺,气管插管固定。
2. 经气管缓慢灌注预冷 D-Hanks 液灌洗肺泡 3 次,弃灌洗液清除肺泡内杂质,完整摘取肺组织置于冰上 PBS 漂洗。
3. 剔除肺门血管、支气管多余结缔组织,剪碎肺组织至 0.5~1mm³ 细小组织块。
三、细胞分离与消化
1. 组织块加入 Ⅰ 型胶原酶,37℃水浴消化 30min,每 10min 震荡一次。
2. 加入完全培养基终止消化,反复吹打制成单细胞悬液。
3. 悬液加入红细胞裂解液室温裂解 3min,离心弃上清去除红细胞。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液先后过 100 目、200 目滤网,采用差速贴壁法:先接种培养 1h 去除成纤维细胞杂细胞。
2. 收集未贴壁细胞悬液,调整细胞密度接种于培养板 / 培养瓶。
3. 37℃5% CO₂培养,48h 换液,每 2 天换液,细胞长满后按需传代鉴定。