兔子宫成纤维细胞分离自子宫组织；子宫是孕育胎儿的器官，位于盆腔中部，膀胱与直肠之间，其位置可随膀胱与直肠的充盈程度或体位而有变化。子宫的正常位置主要依靠子宫诸韧带、盆膈、尿生殖膈及会阴中心腱等结构维持，这些结构受损或松弛时，可以引起子宫脱垂。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来；成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的子宫成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30 min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6 h后细胞基本贴壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。子宫成纤维细胞的主要特征：①是子宫的重要细胞组成，在体外易于培养；②在子宫损伤后能修复和重塑子宫；③在子宫炎症时能有效控制炎症扩散。
产品属性 product attributes
产品名称 兔子宫成纤维细胞
组织来源 子宫组织
默认种属 新西兰大白兔，其他咨询
培养基： 兔子宫成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔子宫成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测 quality test
实验室分离的兔子宫成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介 method
实验室分离的兔子宫成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来。
操作步骤 operation steps
步骤一：实验前期无菌准备提前30分钟启动超净工作台紫外消毒，全面消杀工作台内部空间及所有待使用耗材，包括无菌培养皿、离心管、移液耗材、细胞刮等。操作人员完成无菌防护穿戴，酒精消毒手部及操作区域。将兔子宫成纤维细胞专用完全培养基、PBS缓冲液、胰酶消化液提前放入37℃水浴预热，核对试剂有效期与无菌状态，成纤维细胞增殖活性强，需严格保证无菌环境，杜绝杂菌污染影响细胞增殖。
步骤二：细胞快速解冻复苏 取出液氮冻存的兔子宫成纤维细胞，迅速置于37℃恒温水浴快速解冻，持续晃动冻存管加速冰晶融化，严格控制解冻时长，最大程度减少低温对细胞活性的损伤。解冻完成后，酒精消毒冻存管外壁，无菌操作下将细胞悬液转移至含5mL预热完全培养基的15mL离心管中，轻柔混匀，有效稀释冻存液中的DMSO保护剂，降低细胞毒性。
步骤三：离心清洗纯化细胞 将混匀的细胞悬液置于离心机，室温250g离心5分钟，使活细胞充分沉降，分离上清中的冻存杂质与死细胞碎片。离心后小心吸弃上清废液，避免扰动管底细胞沉淀，加入3mL无菌预热PBS缓冲液，轻柔吹打重悬细胞，再次同等参数离心清洗，彻底去除残留保护剂与代谢杂质，提升细胞活性与纯度。
步骤四：精准接种铺板清洗完成后吸弃PBS液体，加入适量专用完全培养基，轻柔吹打制备均匀单细胞悬液，全程避免暴力吹打损伤细胞。采用细胞计数板精准计数，调整细胞密度至1.2×10⁵个/mL，接种于无菌培养瓶内，轻轻十字晃动培养瓶，让细胞均匀分布于培养底部，防止细胞堆叠、局部密度过高影响生长。
步骤五：恒温密闭培养 将接种后的培养瓶平稳放入37℃、5%CO₂饱和湿度培养箱中静置培养，前24小时保持培养箱环境稳定，不移动、不开启培养瓶，保证细胞顺利贴壁。兔子宫成纤维细胞贴壁速度较快，培养期间稳定的温湿度与CO₂浓度可有效促进细胞伸展、附着，为后续快速增殖奠定基础。
步骤六：定时换液养护 培养24小时后观察细胞贴壁情况，完成首次换液，吸弃陈旧培养基与悬浮死细胞，更换新鲜预热完全培养基。后续每48小时常规换液一次，及时清除细胞代谢产生的废物，补充氨基酸、生长因子等营养物质，维持培养基渗透压与酸碱平衡，保障细胞持续稳定增殖。
步骤七：传代培养与质控 当细胞融合度达到85%左右时进行传代操作，吸弃旧培养基，PBS清洗细胞表面2次，加入胰蛋白酶消化液室温消化2-3分钟，显微镜观察细胞回缩变圆后，立即加培养基终止消化。吹打收集细胞悬液，离心重悬后按1:3比例分瓶传代，该细胞增殖能力强，传代比例可适当调整，每日观察细胞形态，及时剔除污染、老化细胞，保证细胞状态稳定。
