兔子宫颈上皮细胞分离自子宫颈组织；子宫颈位于子宫下部，近似圆锥体，上端与子宫体相连，下端深入阴道。阴道顶端的穹隆又将子宫颈分为两部分：宫颈突入阴道的部分称宫颈阴道部，在阴道穹隆以上的部分称宫颈阴道上部。宫颈的中央为前后略扁的长梭性管腔，其上端通过宫颈内口与子宫腔相连，其下端通过宫颈外口开口于阴道。内外口之间即宫颈管。宫颈的大小与宫体比例随年龄及内分泌状态等而变化；宫颈壁由黏膜、肌层和外膜组成。子宫颈可有多种疾病，包括胚胎发育异常、炎症、瘤样病变、良性肿瘤、恶性肿瘤、损伤、宫颈性不孕、辅助生育技术、宫颈与性、宫颈妊娠等许多问题，体外培养的子宫颈上皮细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。
产品属性 product attributes
产品名称 兔子宫颈上皮细胞
组织来源 子宫组织
默认种属 新西兰大白兔，其他咨询
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔子宫颈上皮细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、EGF、Hydrocortisone、肾上腺素、甲状腺素、Insulin、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔子宫颈上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及
质量检测 quality test
实验室分离的tu子宫颈上皮细胞经Cytokeratin-19免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介 method
实验室分离的兔子宫颈上皮细胞采用胶原酶消化法，结合上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
操作步骤 operation steps
步骤一：无菌实验环境搭建 提前30分钟对超净工作台、生物安全柜进行紫外灭菌，所有无菌耗材、试剂提前放入工作台消毒备用。操作人员严格执行无菌操作规范，全身无菌防护，手部酒精消杀。将上皮细胞专用培养基、PBS缓冲液、温和消化液预热至37℃，子宫颈上皮细胞较为娇嫩，抗逆性弱，需全程保证试剂无菌、环境洁净，杜绝任何污染风险。
步骤二：细胞温和解冻复苏 取出冻存细胞，37℃水浴快速轻柔解冻，保留微量冰晶即刻取出，避免水浴过久损伤上皮细胞膜结构。冻存管外壁酒精消毒后，无菌转移细胞悬液至含预热完全培养基的离心管中，缓慢轻柔吹打混匀，稀释冻存保护剂，减少化学毒性对娇嫩上皮细胞的损伤。
步骤三：低速离心纯化处理 采用室温220g低速离心6分钟，相较于成纤维细胞，上皮细胞更脆弱，降低离心转速与延长时间，可避免细胞挤压破损。离心后轻柔吸弃上清废液，加入预热无菌PBS缓冲液温和重悬细胞，再次低速离心清洗，彻底清除残留杂质，最大程度保留活细胞活性。
步骤四：低密精准接种 吸弃PBS废液，加入上皮细胞专用完全培养基，轻柔吹打制备单细胞悬液，计数后调整细胞密度至8×10⁴个/mL，低密度接种可避免上皮细胞密度过高导致分化异常。将细胞悬液接种至培养瓶，缓慢晃动铺匀，保证细胞分散均匀，为细胞贴壁、极性生长提供充足空间。
步骤五：稳定恒温贴壁培养 将培养瓶置于37℃、5%CO₂、饱和湿度培养箱静置培养，前36小时禁止挪动培养瓶，兔子宫颈上皮细胞贴壁速度较慢，需要更长静置时间完成贴壁伸展。全程稳定培养环境参数，避免温度、CO₂浓度波动导致细胞贴壁失败、凋亡。
步骤六：精细化换液养护 培养36小时后观察细胞贴壁状态，轻柔吸弃旧培养基，避免触碰贴壁细胞，缓慢加入新鲜预热完全培养基。后续每72小时换液一次，上皮细胞代谢速率较慢，无需频繁换液，同时换液操作全程轻柔，防止机械力损伤细胞，维持细胞正常形态与生长活性。
步骤七：谨慎传代扩增 细胞融合度达75%-80%时进行传代，PBS轻柔清洗细胞2次，使用低浓度胰蛋白酶温和消化4分钟，显微镜观察细胞完全回缩脱壁趋势后，立即加培养基终止消化。轻柔吹打收集细胞，低速离心重悬，按1:2低比例传代，上皮细胞增殖能力有限，严禁高密度传代，定期观察细胞上皮形态，杜绝细胞去分化。
