小肠黏膜上皮细胞是构成小肠黏膜屏障的核心细胞，分离自十二指肠、空肠或回肠组织。小肠作为人体消化吸收的主要场所，其黏膜表面布满环形皱襞和小肠绒毛，上皮细胞紧密排列形成绒毛表层，使小肠吸收面积扩大约600倍。
产品属性 product attributes
产品名称: 小肠黏膜上皮细胞
组织来源：人/小鼠正常小肠组织
细胞形态：上皮细胞样，多角形，呈铺路石状排列
生长特性：贴壁生长，需依赖细胞外基质支撑
保存条件：冻存细胞可在-80℃保存1个月，液氮中长期保存可达数年
包被条件：鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm²)或Matrigel基质胶包被培养瓶
培养基：上皮细胞专用培养基，添加10%胎牛血清、表皮生长因子(EGF)、胰岛素、转铁蛋白等生长添加剂
培养环境：37℃、5%CO₂培养箱，湿度≥95%
换液频率：每2-3天更换一次新鲜培养基
传代比例：细胞融合度达80-90%时，按1:2至1:3比例传代
消化液：0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，37℃消化1-2分钟
质量检测 quality test
实验室分离的小肠黏膜上皮细胞经Cytokeratin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介 method
实验室分离的小肠黏膜上皮细胞采用胶原酶消化法结合差速贴壁法、并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
操作步骤 operation steps
细胞复苏：冻存管 37℃水浴速融；酒精消毒外壁；悬液转入小肠黏膜上皮专用完全培养基；离心弃上清；重悬接种于胶原包被培养瓶，37℃培养。
细胞换液：复苏 24 h 首次换液；PBS 轻洗单层细胞；预热新鲜小肠上皮完全培养基；每 2‑3 天换液一次。
细胞传代：汇合度 80%；弃培养液 PBS 洗涤；胰酶‑EDTA 消化 3‑5 min；镜下细胞回缩；上皮完全培养基终止消化。
细胞消化收集：轻柔吹打瓶壁制成单细胞悬液；离心重悬；传代比例 1:2‑1:3；小肠原代上皮寿命有限，尽量用低代次做实验。
细胞冻存：收集低代次健康细胞沉淀；上皮冻存液重悬；1‑2×10⁶细胞 /mL；分装冻存管液氮保存。
细胞形态观察鉴定：多边形上皮铺路石样；E‑cadherin、CK 上皮标志物鉴定。
细胞污染应急处理：污染样本丢弃隔离；操作台灭菌；剩余细胞换液加双抗，每日观察状态。
