成真皮微血管内皮细胞来源于真皮微血管，构成皮肤微循环屏障。这类细胞调节皮肤微血管通透性和新生血管形成，参与皮肤创伤修复中的血管新生，在皮肤血管病变、创伤愈合和肿瘤血管生成研究中具有重要价值。
产品属性 product attributes
产品名称: 成真皮微血管内皮细胞
组织来源：成人正常真皮组织
细胞形态：多角形或短梭形，呈铺路石状排列
生长特性：贴壁生长，接触抑制明显
保存条件：冻存细胞可在-80℃保存1个月，液氮中长期保存可达数年
培养基：内皮细胞专用培养基，添加FBS、内皮细胞生长因子(ECGF)、肝素、青霉素-链霉素双抗
培养环境：37℃、5%CO₂培养箱，湿度≥95%
换液频率：每2-3天更换一次新鲜培养基
传代比例：细胞融合度达80-90%时，按1:2至1:3比例传代
消化液：0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，37℃消化1-2分钟
包被条件：推荐使用明胶或纤维连接蛋白包被培养瓶
质量检测 quality test
实验室分离的成真皮微血管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介 method
实验室分离的成真皮微血管内皮细胞采用胶原酶消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
操作步骤 operation steps
1. 皮肤样本清洗去脂肪；Dispase II 4℃过夜分离真皮‑表皮，弃表皮层。
2. 真皮组织充分剪碎，加入 I 型胶原酶 37℃水浴消化 75min。
3. 内皮专用完全培养基终止消化，70μm 滤网过滤组织悬液。
4. 300g 离心 5min，弃上清，内皮细胞培养基重悬沉淀。
5. 差速贴壁：悬液先孵育 1.5h，弃已贴壁成纤维细胞，收集上清内皮细胞。
6. 将上清接种明胶包被培养瓶，37℃5% CO₂培养，24h 首次换液。
7. CD31 免疫磁珠纯化；vWF/CD31 荧光鉴定内皮纯度。
