人源脐带间充质干细胞是从脐带华通氏胶中分离的间充质干细胞,具有多向分化潜能和免疫调节能力。这类细胞可分化为骨、软骨、脂肪、神经等多种细胞,取材方便、免疫原性低、无伦理争议,是再生医学和组织工程领域最具应用前景的干细胞来源之一。
产品属性 product attributes
产品名称: 人源脐带间充质干细胞
组织来源:人脐带组织(华通氏胶)
细胞形态:长梭形或纺锤形,呈成纤维细胞样
生长特性:贴壁生长,密度低时呈放射状排列,高密度时呈漩涡状
保存条件:冻存细胞可在-80℃保存1个月,液氮中长期保存可达数十年
培养基:间充质干细胞专用培养基,添加FBS、青霉素-链霉素双抗
培养环境:37℃、5%CO₂培养箱,湿度≥95%
换液频率:每2-3天更换一次新鲜培养基
传代比例:细胞融合度达80-90%时,按1:2至1:3比例传代
消化液:0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液,37℃消化2-3分钟
体外寿命:可传代培养10-15代,低代数细胞状态最佳
质量检测 quality test
实验室分离的人源脐带间充质干细胞经CD90/CD44免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介 method
实验室分离的人源脐带间充质干细胞采用组织消化法结合差速贴壁法、并通过间充质干细胞专用培养基培养筛选制备而来。
操作步骤 operation steps
细胞复苏:37℃水浴快速融化冻存管;酒精擦拭管壁;细胞悬液转入脐带 MSC 完全培养基;离心 5 min 弃上清去除冻存剂;重悬接种于普通培养瓶,37℃ 5% CO₂培养。
细胞换液:复苏 48 h 首次半换液,弃一半旧培养基补加新鲜 MSC 培养基;后续每 2‑3 天全换液一次。
细胞传代:汇合度 85‑90%;弃培养液 PBS 清洗 2 次;胰酶‑EDTA 消化 3‑5 min;镜下梭形细胞回缩变圆;MSC 完全培养基终止消化。
细胞消化收集:吹打瓶壁获得单细胞悬液;离心重悬;传代比例 1:3‑1:5,间充质干细胞增殖快。
细胞冻存:取 P3‑P5 代健康对数生长期细胞沉淀;干细胞专用无血清冻存液重悬;细胞密度 1×10⁶‑2×10⁶/mL;分装冻存管,程序降温液氮长期保存。
细胞形态观察鉴定:长梭形、漩涡状生长;流式 CD73、CD90、CD105 阳性,CD34、CD45 阴性鉴定。
细胞污染应急处理:污染瓶移出丢弃;超净台全面消毒;剩余细胞换液添加双抗连续观察。
