人源胚胎脑微血管内皮细胞构成脑微血管壁内层，是血脑屏障的核心结构成分。这类细胞通过紧密连接形成高阻抗屏障，严格限制血液中有害物质进入脑组织，同时选择性转运营养物质，维持脑微环境稳态，是研究血脑屏障功能及药物脑靶向递送的重要模型。
产品属性 product attributes
产品名称: 人源胚胎脑微血管内皮细胞
组织来源：人胚胎脑组织
细胞形态：多角形或短梭形，呈铺路石状排列
生长特性：贴壁生长，接触抑制明显
保存条件：冻存细胞可在-80℃保存1个月，液氮中长期保存可达数年
培养基：内皮细胞专用培养基，添加FBS、内皮细胞生长因子(ECGF)、青霉素-链霉素双抗
培养环境：37℃、5%CO₂培养箱，湿度≥95%
换液频率：每2-3天更换一次新鲜培养基
传代比例：细胞融合度达80-90%时，按1:2至1:3比例传代
消化液：0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，37℃消化1-2分钟
包被条件：推荐使用明胶或纤维连接蛋白包被培养瓶
质量检测 quality test
实验室分离的人源胚胎脑微血管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介 method
实验室分离的人源胚胎脑微血管内皮细胞采用胶原酶消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
操作步骤 operation steps
细胞复苏：冻存管 37℃速融；酒精消毒管壁；细胞悬液加到内皮细胞完全培养基；1000 rpm 离心 5 min 弃上清；EC 专用培养基重悬；接种于明胶包被培养瓶；37℃，5% CO₂培养。
细胞换液：复苏 24 h 换液去除死细胞碎片；PBS 轻洗；添加新鲜脑微血管内皮完全培养基；每 2‑3 天换液。
细胞传代：汇合度 75‑80% 传代；弃培养液，PBS 洗 2 次；少量胰酶‑EDTA 消化，37℃ 2‑4 min；镜下细胞收缩变圆；内皮完全培养基终止消化。
细胞消化收集：轻柔吹打瓶壁，制成单细胞悬液；离心 1000 rpm，5 min；弃上清重悬；传代比例 1:2，内皮细胞不要过度消化，避免损伤。
细胞冻存：收集对数期细胞沉淀；内皮专用冻存液重悬，细胞密度 1‑2×10⁶/mL；分装冻存管；程序降温后液氮保存。
细胞形态观察鉴定：显微镜下呈鹅卵石铺路石样；免疫 CD31、vWF 内皮标志物染色鉴定。
细胞污染应急处理：立即隔离污染瓶；丢弃污染样本；超净台全面消毒；其余细胞换液并添加双抗，每日监测。
