人源心脏微血管内皮细胞构成心肌毛细血管壁内层，是心肌微循环的基础。这类细胞通过调节微血管通透性和血流分布维持心肌营养供应，参与心肌炎症反应和缺血再灌注损伤，是研究心肌微循环障碍和心力衰竭的重要模型。
产品属性 product attributes
产品名称: 人源心脏微血管内皮细胞
组织来源：人正常心脏组织
细胞形态：多角形或短梭形，呈铺路石状排列
生长特性：贴壁生长，接触抑制明显
保存条件：冻存细胞可在-80℃保存1个月，液氮中长期保存可达数年
培养基：内皮细胞专用培养基，添加FBS、内皮细胞生长因子(ECGF)、肝素、青霉素-链霉素双抗
培养环境：37℃、5%CO₂培养箱，湿度≥95%
换液频率：每2-3天更换一次新鲜培养基
传代比例：细胞融合度达80-90%时，按1:2至1:3比例传代
消化液：0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，37℃消化1-2分钟
包被条件：推荐使用明胶或纤维连接蛋白包被培养瓶
质量检测 quality test
实验室分离的人源心脏微血管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介 method
实验室分离的人源心脏微血管内皮细胞采用胶原酶消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
操作步骤 operation steps
细胞复苏：37℃水浴快速解冻冻存细胞；管壁酒精消毒；悬液移入含心脏微血管内皮完全培养基离心管；离心弃上清；重悬接种于明胶包被培养瓶，放入培养箱。
细胞换液：复苏 24 h 首次换液清除死细胞；PBS 漂洗单层细胞；预热新鲜完全培养基；每 2‑3 天更换培养液。
细胞传代：细胞汇合 75‑80%；弃培养基 PBS 洗涤；胰酶‑EDTA 消化 2‑4 min；镜下细胞变圆回缩；血清培养基终止消化。
细胞消化收集：缓慢吹打瓶壁获得单细胞悬液；离心 5 min 1000 rpm；重悬；按 1:2 分瓶接种，心脏微血管内皮贴壁较弱，吹打力度轻柔。
细胞冻存：消化收集健康对数生长期细胞；内皮冻存液重悬，1‑2×10⁶/mL；分装冻存管，程序降温液氮保存。
细胞形态观察鉴定：镜下鹅卵石样单层生长；CD31、vWF、CD144 免疫染色鉴定内皮纯度。
细胞污染应急处理：污染细胞隔离丢弃；操作台灭菌；剩余细胞换液，添加青霉素‑链霉素双抗连续观察 2‑3 天。
